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Séance de cours

Méthodes de purification des protéines

Dans cours

CH-319: Experimental biochemistry and biophysics

A 7-week long (4+8 h) experiment where you plan and construct a fluorescent sensor protein starting from DNA bricks. The protein will be expressed in and purified from E.coli, characterized by biochemical and spectroscopic methods. Your report will be in ...

Description

Cette séance de cours couvre la purification des protéines exprimées, y compris des sujets tels que la transformation en E. coli, la lyse des bactéries, la chromatographie sur ions métalliques immobilisés (IMAC), l'analyse des protéines purifiées et la base de données des protéines fluorescentes.

Enseignant·e

Rudolf Hovius

Source officielle

Concepts associés (16)

Protéine de fusion

Une protéine de fusion est une protéine artificielle obtenue par la combinaison de différentes protéines, ou partie de protéines. Elle est obtenue à la suite de la création par recombinaison de l'ADN d'un gène comportant les cadres de lecture ouverts correspondant aux protéines ou parties de protéines désirées. Les protéines de fusion peuvent également être appelées protéines chimères. Une des applications les plus connues des protéines de fusion est la fusion d'une protéine d'intérêt à une protéine fluorescente.

Protéine fluorescente verte

vignette|Aequorea victoria. La protéine fluorescente verte (souvent abrégé GFP, de l'anglais « Green Fluorescent Protein ») est une protéine ayant la propriété d'émettre une fluorescence de couleur verte. Issue d'une méduse (Aequorea victoria), cette protéine est intrinsèquement fluorescente sous l'action d'une enzyme, l'aequoréine, une luciférase qui agit en présence de calcium. Son gène peut être fusionné in-vitro au gène d'une protéine que l'on souhaite étudier.

Purification des protéines

La purification des protéines est une série de processus divers destinés à isoler une ou plusieurs protéines à partir d'un mélange complexe (cellules, autres particules ou matrices). C'est une étape importante en recherche fondamentale pour la caractérisation de la fonction (études des propriétés), de la structure, sa composition en acide aminé et des interactions d'une protéine d'intérêt, mais aussi en recherche appliquée et industrie pour préparer des matières et réactifs.

Protéine

redresse=1.36|vignette|Représentation d'une protéine, ici deux sous-unités d'une molécule d'hémoglobine. On observe les représentées en couleur, ainsi que deux des quatre molécules d'hème, qui sont les groupes prosthétiques caractéristiques de cette protéine. redresse=1.36|vignette|Liaison peptidique –CO–NH– au sein d'un polypeptide. Le motif constitue le squelette de la protéine, tandis que les groupes liés aux sont les chaînes latérales des résidus d'acides aminés.

Matrice d'une application linéaire

En algèbre linéaire, la matrice d'une application linéaire est une matrice de scalaires qui permet de représenter une application linéaire entre deux espaces vectoriels de dimensions finies, étant donné le choix d'une base pour chacun d'eux. Soient : E et F deux espaces vectoriels sur un corps commutatif K, de dimensions respectives n et m ; B = (e, ... , e) une base de E, C une base de F ; φ une application de E dans F.

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Purification des protéines: IMAC

Couvre la purification des protéines en utilisant la chromatographie IMAC et les méthodes d'analyse.

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Exploration de la structure protéique

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Expression et purification des protéines

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Protéomique : Modifications et interactions post-traductionnelles

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Protéine fluorescente verte

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