Séance de cours

Purification des protéines: IMAC

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Dans cours

CH-319: Experimental biochemistry and biophysics

A 7-week long (4+8 h) experiment where you plan and construct a fluorescent sensor protein starting from DNA bricks. The protein will be expressed in and purified from E.coli, characterized by biochemical and spectroscopic methods. Your report will be in ...

Description

Cette séance de cours couvre la purification des protéines en utilisant la chromatographie sur ions métalliques immobilisés (IMAC). En commençant par la transformation d'E. coli et la lyse des bactéries, l'instructeur explique le processus étape par étape, y compris la liaison, le lavage et l'élution dans la purification IMAC. L'analyse de la protéine purifiée et l'utilisation d'une base de données de protéines fluorescentes pour l'identification sont également discutées.

Enseignant·e

Rudolf Hovius

Expertise Protein structure, expression & purificationÂ•Molecular interaction & receptor activationÂ•Fluorescence imaging & spectroscopySignalling & sensing Mission => Teaching: Lecture courses, tutorials and practicals in biochemistry, biophysical chemistry of membranes and signalling processes. Participating to the Commission d'Enseignement and Commission de l'Ecole Doctorale of Chemistry and Chemical Engineering.=> Research interests: Protein function and structure, Membrane protein (especially receptors

Source officielle

Concepts associés (12)

Protéine de fusion

Une protéine de fusion est une protéine artificielle obtenue par la combinaison de différentes protéines, ou partie de protéines. Elle est obtenue à la suite de la création par recombinaison de l'ADN d'un gène comportant les cadres de lecture ouverts correspondant aux protéines ou parties de protéines désirées. Les protéines de fusion peuvent également être appelées protéines chimères. Une des applications les plus connues des protéines de fusion est la fusion d'une protéine d'intérêt à une protéine fluorescente.

Purification des protéines

La purification des protéines est une série de processus divers destinés à isoler une ou plusieurs protéines à partir d'un mélange complexe (cellules, autres particules ou matrices). C'est une étape importante en recherche fondamentale pour la caractérisation de la fonction (études des propriétés), de la structure, sa composition en acide aminé et des interactions d'une protéine d'intérêt, mais aussi en recherche appliquée et industrie pour préparer des matières et réactifs.

Chromatographie

La chromatographie est une méthode physico-chimique qui sert à séparer les différentes substances présentes dans un mélange (échantillon en phase homogène liquide ou gazeuse). vignette|458x458px|Chromatographie sur couche mince faisant apparaître les composants d'une plante verte, comme la chlorophylle. Il est probable que la séparation de pigments inspira le nom de la méthode. L'appareil utilisé pour effectuer certaines chromatographies se nomme chromatographe. L'image ou le diagramme obtenu par chromatographie est appelé chromatogramme.

Interaction protéine-protéine

thumb|upright=1.2|L'inhibiteur de la ribonucléase en forme de fer à cheval (en représentation « fil de fer ») forme une interaction protéine–protéine avec la protéine de la ribonucléase. Les contacts entre les deux protéines sont représentés sous forme de taches colorées. Une Interaction protéine–protéine apparait lorsque deux ou plusieurs protéines se lient entre elles, le plus souvent pour mener à bien leur fonction biologique.

Étiquette poly-histidine

Une étiquette poly-histidine est un motif d'acides aminés dans une protéine constitué d'au moins six résidus histidine, souvent insérés à l’extrémité N- ou C- terminale de la protéine. On la désigne parfois par les noms hexa-histidine tag (en anglais), 6xHis-tag ou encore la marque déposée His-tag de EMD Biosciences. Elle est fréquemment utilisée pour la purification par chromatographie d'affinité de protéines synthétisées par génie génétique.

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Explorer les protéines: structure, purification et analyse

Couvre les méthodes d'exploration, de purification et d'analyse des protéines, y compris le séquençage, la mesure de la concentration et la détection des anticorps.

Expression et purification des protéines

Explore l'expression des protéines, la purification et la filtration sur gel pour isoler les complexes protéiques.

Chromatographie des protéines: Techniques de purification

Explore les méthodes de chromatographie des protéines, y compris la purification par affinité et l'élimination des étiquettes, pour des processus de purification des protéines efficaces.

Exploration de la structure protéique

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Protéomique : Modifications et interactions post-traductionnelles

Explore la protéomique pour les modifications post-traductionnelles et les interactions protéiques.

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Étiquette poly-histidine

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