Publication

Protocol for the biochemical isolation of endosomal membranes associated with endoplasmic reticulum in HeLa cells

2026

Résumé

Endosome-endoplasmic reticulum contact sites (EERCS) are highly dynamic membrane interfaces that regulate trafficking and signaling, yet biochemical approaches to isolate them remain nonexistent, unlike established protocols for other types of contacts. Here, we present a protocol to isolate and purify endosomal membranes associated with endoplasmic reticulum membranes from cultured mammalian cells using subcellular fractionation and a two-step density-gradient centrifugation. We describe steps for cell expansion, post-nuclear supernatant collection, and the isolation of light membranes and EERCS. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Da Graça et al. 1

Source officielle

https://infoscience.epfl.ch/entities/publication/4112a040-a99c-4e26-b0ee-de9b3ad6e4bb

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Concepts associés (31)

Réticulum endoplasmique

En biologie cellulaire, le réticulum endoplasmique (forme abrégée : RE) est un organite présent dans les cellules eucaryotes et lié à la membrane nucléaire. Il synthétise les protéines, produit des macromolécules et transfère des substances vers l'appareil de Golgi via des vésicules. C'est l'organite se situant à la base du système endomembranaire des cellules eucaryotes. Il faut tout de même préciser que les protéines synthétisées dans le RE Granuleux sortent immatures de celui-ci et subissent donc des lourdes modifications dans l'appareil de Golgi afin d'obtenir une protéine mature.

Système endomembranaire

Le système endomembranaire se compose des différentes membranes internes qui sont en suspension dans le cytoplasme d'une cellule eucaryote. Ces membranes divisent la cellule en compartiments fonctionnels et structurels appelés organites. Chez les eucaryotes, les organites du système endomembranaire comprennent : la partie externe de la membrane nucléaire, le réticulum endoplasmique, l'appareil de Golgi, les lysosomes, les vacuoles, les vésicules et des endosomes.

Membrane plasmique

La membrane plasmique, également appelée membrane cellulaire, membrane cytoplasmique, voire plasmalemme, est une membrane biologique séparant l'intérieur d'une cellule, appelé cytoplasme, de son environnement extérieur, c'est-à-dire du milieu extracellulaire. Cette membrane joue un rôle biologique fondamental en isolant la cellule de son environnement.

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